Explorar o Anti-Burkholderia cepacia Atividade dos Óleos Essenciais: Uma Análise Preliminar

Resumo

neste trabalho, temos verificado a capacidade dos óleos essenciais extraídos de seis tipos diferentes de plantas medicinais (Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Lavandula officinalis, alternifolia, e Thymus vulgaris) para inibir o crescimento de 18 bacteriana tipo de estirpes pertencentes a 18 espécies de Burkholderia cepacia (Cco). Estas bactérias são patógenos humanos oportunistas que podem causar infecções graves em pacientes imunocomprometidos, especialmente aqueles afetados por fibrose cística (CF), e são muitas vezes resistentes a múltiplos antibióticos. A análise dos aromatogramas produzidos pelos seis óleos revelou que, apesar de sua composição química diferente, todos eles eram capazes de contrastar o crescimento dos Membros Bcc. No entanto, três deles (i.e., Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare e Thymus vulgaris) foram particularmente activos versus as estirpes Bcc, incluindo as que exibem um elevado grau ou resistência à ciprofloxacina, um dos antibióticos mais utilizados no tratamento de infecções Bcc. Estes três óleos também são ativos em relação a estirpes ambientais e clínicas (isoladas de doentes com CF), sugerindo que podem ser utilizados no futuro para combater infecções complexas de B. cepacia.

1. Introdução Os óleos essenciais (EOs) consistem numa mistura complexa de substâncias voláteis e perfumantes tipicamente sintetizadas por todos os órgãos vegetais como metabolitos secundários e extraídas por destilação de água ou vapor, extracção de solventes, expressão sob pressão, fluido supercrítico e extracções subcríticas de água . Os EOs incluem dois grupos biossinteticamente relacionados, principalmente terpenos e terpenóides e, secundariamente, constituintes aromáticos e alifáticos, todos eles caracterizados por baixo peso molecular. Propriedades biológicas do EOs terpenóides não estão bem elucidados, mas uma função de proteger as plantas contra predadores e patógenos microbianos é postulada e eles podem ser importantes na interação das plantas com outros organismos (por exemplo, atração de polinizadores). A mesma espécie vegetal pode produzir diferentes quimiótipos EOs (ou seja, componentes químicos). Por exemplo, Thymus vulgaris, espécies morfologicamente idênticas com um cariótipo estável, consistem em sete quimiótipos diferentes dependendo se o componente dominante do óleo essencial é timol, carvacrol, linalol, geraniol, hidrato de sabineno, α-terpineol ou eucalyptol.nos últimos anos, o aparecimento de resistência bacteriana contra múltiplos antibióticos acelerou drasticamente. As classes de quinolonas/fluoroquinolonas, azóis e polienos de antimicrobianos são frequentemente o último recurso para tratar infecções; assim, as chances de adquirir resistência contra esses antimicrobianos são maiores . Os EOs e outros extratos de plantas possuem propriedades antibacterianas, antifúngicas e antivirais e foram rastreados em todo o mundo como fontes potenciais de novos compostos antimicrobianos . Assim, EOS e seus constituintes podem ser considerados no futuro para mais avaliações clínicas e possíveis aplicações e como adjuvantes de medicamentos atuais . As propriedades antimicrobianas dos EOs foram notificadas em vários estudos. A elevada actividade antimicrobiana das espécies Thymus e Origanum foi atribuída aos seus componentes fenólicos, tais como o timol e o carvacrol e os de Eugenia caryophyllus, Syzygium aromaticum e Ocimum basilicum ao eugenol . De facto, o tomilho e os orégãos podem inibir algumas estirpes bacterianas patogénicas tais como Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Salmonella colerasuis e Salmonella typhimurium, com a inibição directamente relacionada com o carvacrol e o timol . Os mecanismos pelos quais os óleos essenciais podem inibir os microrganismos envolvem diferentes modos de acção e, em parte, podem dever-se à sua hidrofobicidade. Como resultado, eles são particionados na camada lipídica da membrana celular, tornando-a mais permeável, levando a vazamento de conteúdo vital da célula . Existem menos relatórios sobre os mecanismos de acção da combinação EOs ou dos seus componentes purificados em microrganismos. Incluem a inibição sequencial de uma via bioquímica comum, a inibição das enzimas protectoras e a utilização de agentes activos da parede celular para aumentar a captação de outros antimicrobianos. A capacidade dos hidrocarbonetos de interagir com a membrana celular facilita a penetração do carvacrol na célula. Em muitos casos, a atividade resulta da interação complexa entre as diferentes classes de compostos tais como fenóis, aldeídos, cetonas, álcoois, ésteres, éteres, ou hidrocarbonetos encontrados em EOs . É provável que seja mais difícil para as bactérias desenvolverem resistência aos EOs multicomponentes do que aos antibióticos comuns que são frequentemente compostos por apenas uma única entidade molecular . Por exemplo, a natureza multicomponente do óleo de árvore de chá poderia reduzir o potencial de Resistência a ocorrer espontaneamente, uma vez que múltiplas mutações simultâneas podem ser necessárias para superar todas as ações antimicrobianas de cada um dos componentes. Isto significa que muitos objectivos teriam de se adaptar para superar os efeitos do petróleo .os estudos clínicos com EOs são escassos. O uso tópico é a estratégia mais promissora no momento, tanto para a pele como para as membranas mucosas. Existe alguma esperança para uso por inalação, mas é necessária avaliação clínica. Existem poucas informações sobre a segurança em relação à administração oral de EOs, pelo que é necessário um aumento do conhecimento sobre a farmacocinética, farmacodinâmica e a potencial toxicidade dos EOs administrados por esta via .

particularmente interessante deste ponto de vista é a possibilidade de tratar infecções de doentes com fibrose quística (CF). Um dos mais importantes patógenos oportunistas da CF é representado por bactérias pertencentes ao complexo Burkholderia cepacia (Bcc) pertencentes ao gênero muito heterogêneo Burkholderia, que atualmente compreende mais de setenta espécies, isoladas de uma ampla gama de nichos. Muitos membros do gênero podem causar infecção em plantas, animais e seres humanos, e a maioria dos estudos têm, portanto, focado nessas espécies patogênicas devido à sua importância clínica . No entanto, recentemente, um número crescente de espécies de Burkholderia associadas com plantas ou com o meio ambiente e capaz de fixar nitrogênio, para nodular leguminosas ou para promover o crescimento vegetal, foram descritos . Entre as espécies patogênicas, a bactéria Bcc , um grupo de bactérias geneticamente distintas, mas fenotipicamente semelhantes, que até agora compreende 18 espécies bacterianas intimamente relacionadas, tornaram-se conhecidos como patógenos oportunistas em seres humanos. Embora não sejam considerados agentes patogénicos importantes para a população humana normal, alguns deles são considerados como ameaças graves para grupos específicos de doentes, como os doentes com CF . O CF é a doença genética mais fatal dos caucasianos, e a principal causa de morbilidade e mortalidade nos doentes é a infecção pulmonar crónica envolvendo diferentes espécies de bactérias (principalmente Pseudomonas aeruginosa), fungos e vírus . No que diz respeito às espécies Bcc, a prevalência (2009 e 2010) da infecção crónica varia entre 0% e 12% da população do FC que frequenta vários centros CF . Embora não seja elevado em comparação com outros agentes patogénicos CF, as infecções por Ccb estão correlacionadas com prognósticos mais baixos, estadias hospitalares mais prolongadas e um risco aumentado de morte .uma das razões para a elevada taxa de mortalidade em infecções causadas por espécies Bcc é a sua elevada resistência aos antibióticos: são intrinsecamente resistentes a muitos antibióticos e podem desenvolver resistência in vivo a essencialmente todas as classes de medicamentos antimicrobianos . Esta alta resistência a antibióticos é o resultado de mecanismos específicos para determinadas classes de antibióticos e de uma intrínseca resistência, característica de todas as bactérias Gram-negativas, devido à cooperação entre a membrana externa da barreira e a expressão de sistemas de efluxo . Entre sistemas de efluxo multi-drogas, a resistência intrínseca ao fármaco de bactérias Gram-negativas é principalmente atribuível aos exportadores de medicamentos do tipo RND (resistance-nodulation-cell division protein family). A presença e distribuição destes tipos de proteínas em alguns genomas Burkholderia disponíveis são conhecidas , e alguns destes sistemas também têm sido caracterizados experimentalmente .são sempre necessários novos agentes antimicrobianos para neutralizar os mutantes resistentes à Bcc que continuam a ser seleccionados pelos actuais regimes terapêuticos. A resistência bacteriana frequentemente resulta em falha de tratamento que causa consequências graves, especialmente em pacientes criticamente doentes . As prescrições de antibióticos inadequadas ou desnecessárias, a utilização excessiva de antibióticos nas indústrias agrícola e pecuária e a falta de adesão dos doentes a regimes de antibióticos completos, que seleccionam bactérias resistentes, parecem ser os principais factores que contribuem para o aparecimento da resistência aos antibióticos. As bactérias resistentes podem também espalhar-se e tornar-se problemas mais vastos de controlo de infecções, não só dentro das instituições de saúde, mas também dentro das Comunidades. Por esta razão, há uma necessidade premente de desenvolver novas terapias antibacterianas não só contra bactérias Bcc, mas também contra outros diferentes patógenos humanos . Neste contexto, uma das abordagens mais importantes é representado pela busca de novas drogas naturais de “incomum” fontes; particularmente interessante pode ser o de óleos essenciais, pois eles são multi-componente e, em princípio, a probabilidade de que as bactérias desenvolvem resistência a esta mistura de substâncias pode ser muito menor do que uma única molécula.por conseguinte, o objectivo deste trabalho era explorar a actividade antimicrobiana de seis óleos essenciais diferentes em comparação com um painel de bactérias Bcc, algumas das quais exibindo multirresistência a diferentes medicamentos e com fontes clínicas ou ambientais, a fim de verificar a possibilidade de utilizar óleos essenciais para combater infecções Bcc em doentes com CF.2. Materiais e métodos

2.1. Estirpes bacterianas e Condições de crescimento

as estirpes bacterianas utilizadas neste trabalho estão listadas no quadro 1. Foram cultivadas em ágar de soja-Triptona (TSA, Oxoid S. p.a., Strada Rivoltana, 20090 Ocorreu Ródano, MI, Itália) médio a 37°C por dois dias, ou no estado líquido Tryptone Soya Caldo (TSB, Oxoid S. p.A. Strada Rivoltana, 20090 Ocorreu Ródano, MI, Itália) médio a 37°C com agitação.

Burkholderia cepacia complex strains
Strain Origin Species Sensitivity to
Eugenia caryophyllata Origanum vulgare Rosmarinus officinalis Lavandula hybrida Melaleuca alternifolia Thymus vulgaris Ciprofloxacin
LMG 13010 CF B. multivorans ES ES S S S ES VS
J2315 CF B. cenocepacia ES ES S S S ES S
LMG 14294 CF B. stabilis ES ES S S S ES NS
LMG 24064 CF B. latens ES ES ES S S ES ES
LMG 24065 CF B. diffusa ES ES VS S S ES VS
LMG 18943 CF B. dolosa ES ES VS S VS ES NS
LMG 24067 CF B. seminalis ES ES S S S ES VS
LMG 24068 CF B. metallica ES ES S S S ES ES
LMG 26883 CF B. pseudomultivorans ES ES VS S S ES VS
LMG 23361 AI B. contaminas ES ES VS S S ES ES
LMG 1222 Env B. cepacia VS ES S S S ES VS
LMG 10929 Env B. vietnamiensis ES ES ES S VS ES ES
LMG 19182 Env B. ambifaria ES ES NS S S ES ES
LMG 20980 Env B. anthina ES ES VS S ES ES ES
LMG 14191 Env B. pyrrocinia ES ES VS S ES ES ES
LMG 22485 Env B. lata ES ES S S S ES ES
LMG 24066 Env B. arboris ES ES VS S S ES ES
LMG 20358 Env B. ubonensis ES ES ES S VS ES ES
CF: strain isolated from cystic fibrosis patient; Env: environmental strain; AI: animal infection; NS, S, VS, and ES: não sensível, sensível, muito sensível e extremamente sensível, respectivamente (de acordo com Ponce et al., 2003) .
Tabela 1
Lista de estirpes bacterianas utilizadas neste trabalho e a sua sensibilidade aos óleos essenciais testados neste trabalho.

2, 2. Aromatogramas
2.2.1. Preparação de suspensões microbianas e meios

cada estirpe bacteriana foi cultivada a 37 ° C em meio líquido (TSB) com agitação; o crescimento foi verificado em intervalos regulares de tempo (como leitura espectrofotométrica em OD600) até que o final da fase exponencial de crescimento foi atingido. Diluições em série 1: 10 a 10-5 de cada suspensão bacteriana foram banhadas em placas de Petri da TSA, a fim de contar os microrganismos e verificar se o número de bactérias nas amostras era adequado à realização dos testes.

TSA, usado para realizar os ensaios de difusão de ágar, foi enriquecido com um volume adequado de Dimetilsulfóxido (DMSO, Carlo Erba Reagenti S. p.a., Strada Rivoltana km 6/7, 20090 ocorreu Ródano, MI, Itália), esterilizado por filtração através de filtros com diâmetro de poros de 0,22 µm (Sartorius, Itália Srl, Viale A. Casati 4, 20835 Muggiò, MB, Itália), obtendo assim a 0,5% (v/v) de soluções identificadas por siglas DTSA. A adição de DMSO, um solvente orgânico aprótico pertencente à categoria dos sulfóxidos, tinha por objectivo facilitar a solubilização dos óleos essenciais no meio aquoso representado pelos meios de cultura.

2.2.2. Preparação de Diluições de Óleos Essenciais

Os óleos essenciais utilizados no presente estudo (Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Lavandula hybrida, alternifolia e Thymus vulgaris) foram todos extraídos por destilação a vapor método, e comprados do mesmo fornecedor (Prodotti Phitocosmetici Dott. Vannucci di Vannucci Daniela e C. Sas, Via La Cartaia Vecchia 3, 59021 Vaiano (PO), Itália). Todas as diluições EOs e EOs foram armazenadas a 4 ° C antes da utilização.

2.2.3. O ensaio de difusão de disco de ágar

as suspensões de células Burkholderia foram estriadas em placas de Petri da DTSA. Discos esterilizados de papel de filtro (Oxoid SpA. Strada Rivoltana, 20090 Rodano, MI, Itália) de 6 mm de diâmetro foram embebidos com 10 µL de cada óxido de ETILENO não diluído e colocados na superfície dos pratos. Além disso, controles negativos e positivos foram aplicadas à superfície de placas de agar; eles foram, respectivamente, o antibiótico ciprofloxacina (3 µg/10 µL) (Oxoid S. p.Um. Strada Rivoltana, 20090 Ocorreu Ródano, MI, Itália) e uma solução de DMSO 0,5% em estéril de água desionizada. As placas foram incubadas a °C durante 48 horas aeróbicamente. Após a incubação, o diâmetro das zonas de inibição foi medido em milímetros, incluindo o diâmetro do disco. A sensibilidade ao EOs foi classificada pelo diâmetro das zonas de inibição do seguinte modo: não sensível para o diâmetro total inferior a 8 mm, sensível para o diâmetro total de 9-14 mm, muito sensível para o diâmetro total de 15-19 mm, e extremamente sensível para o diâmetro total superior a 20 mm . Cada ensaio foi realizado em triplicado em três ensaios experimentais separados.

2, 3. Determinação de Óleo Essencial de Composição

Gás cromatographic (GC) as análises foram realizadas com um HP-5890 série II instrumento equipado com um HP-5 coluna capilar (30 µm × 0,25 mm, 0,25 µm de espessura do filme), trabalhando com o seguinte programa de temperatura: de 60°C por 10 min, rampa de 5°C/min até 220°C; injetor e detector de temperaturas de 250°C; a transportadora de gás nitrogênio (2 mL/min); detector, dual flame ionization detection (FID); taxa de divisão, 1 : 30; injeção, 0,5 µL. A identificação dos componentes foi realizada, para ambas as colunas, por comparação dos seus tempos de retenção com os de amostras autênticas puras e por meio dos seus índices de retenção linear (LRI) em relação à série de hidrocarbonetos. Cromatografia gasosa-espectrometria de massa de impacto de electrões (GC-EIMS) foram realizadas análises com uma cromatografia gasosa Varian CP 3800 (Varian, Inc. Palo Alto, CA) equipado com uma coluna capilar DB-5 (Agilent Technologies Hewlett-Packard, Waldbronn, Alemanha; 30 m × 0,25 mm, espessura do revestimento 0,25 mm) e um detector de massa de iões variano Saturn 2000. As condições analíticas foram as seguintes: a temperatura do injector e da conduta de transferência a 250°C e 240°C, respectivamente, a temperatura do forno a ser programada de 60 a 240°C a 3 ° C/min, o gás portador, o hélio a 1 mL/min, o injector sem fissuras. Identificação dos constituintes foi baseada na comparação dos tempos de retenção com os de amostras autênticas, comparando seus LRI em relação à série de n-hidrocarbonetos e no computador de correspondência comercial e caseiro biblioteca de espectros de massa construída a partir de substâncias puras e os componentes do conhecido amostras e MS dados da literatura . Além disso, as massas moleculares de todas as substâncias identificadas foram confirmadas por cromatografia gasosa-espectrometria de massa de ionização química (GC-CIMS), utilizando metanol como gás de ionização química.

2, 4. As análises estatísticas

zonas de inibição em estirpes Bcc dos diferentes EOs foram analisadas utilizando a análise principal dos componentes, tal como implementado em software anterior . O teste Kruskal-Wallis com a protecção contra erros de Bonferroni foi aplicado para comparar as zonas de inibição globais dos diferentes EOs utilizando o software Analyse-it (Analyse-it Software, Ltd.).).

3. Resultados e discussão

3.1. Composição dos óleos essenciais os óleos essenciais são misturas naturais muito complexas, que podem conter cerca de 20-60 componentes em concentrações bastante diferentes. Eles são caracterizados por dois ou três componentes principais em concentrações bastante elevadas (20-70%) em comparação com outros componentes presentes em quantidades vestigiais. Os terpenóides (principalmente monoterpenóides e sesquiterpenóides) representam geralmente os principais constituintes, mas alguns óleos essenciais são caracterizados pela presença de constituintes aromáticos (fenilpropanóides) e alifáticos, todos caracterizados por baixo peso molecular.os óleos essenciais testados eram amostras comerciais e analisados por CG utilizando como detector uma espectrometria de massa de impacto duplo de FID e de electrões. Os constituintes foram identificados por comparação dos seus tempos de retenção de ambas as colunas com os de amostras autênticas puras e por meio dos seus índices lineares de retenção (LRI) relativos às séries de hidrocarbonetos e dados MS de espectros de massa e Literatura da biblioteca caseira.foram identificados quase 100% das substâncias voláteis do óleo essencial de orégano, sendo 77,2% dos monoterpenos oxigenados, principalmente representados pelo carvacrol, representando 71,8% do Óleo Essencial total; 19,2% dos constituintes eram representados por hidrocarbonetos monoterpénicos, principalmente-cimeno; 2.9% eram hidrocarbonetos sesquiterpenos, e 0,6% eram sesquiterpenos oxigenados.também no caso do óleo essencial de rosmaninho, as substâncias voláteis identificadas foram 99,9% e os constituintes principais foram representados por monoterpenos oxigenados (64,6%), sendo o principal Volátil 1,8-cineol (43,9%). Os hidrocarbonetos monoterpénicos foram 25, 9%, principalmente O α-pineno. Os hidrocarbonetos de sesquiterpeno foram 9,1% e os sesquiterpenos oxigenados foram apenas 0,3%.os constituintes totais identificados do óleo de tomilho foram 99, 5%. Estes voláteis foram caracterizados por 53,7% dos hidrocarbonetos monoterpénicos sendo 47.9% de monoterpenos p-cimeno e oxigenados 45, 6%, principalmente timol (43, 1%). Apenas 0,2% dos voláteis eram hidrocarbonetos sesquiterpenos.

Cerca de 98% dos constituintes do óleo de cravo foram identificados e o principal metabólito foi de eugenol (85%), um típico phenylpropanoid, enquanto 11,2% dos constituintes foram reconhecidos como sesquiterpene hidrocarbonetos sendo β-caryophyllene a principal molécula (9%).

Cerca de todos (99.1%) dos constituintes de M. alternifolia foram identificadas; principais compostos foram monoterpenos oxigenados, sendo 4-terpineol, o principal deles (39.9%). O resto do óleo foi representado principalmente por hidrocarbonetos monoterpenos (41,4%) sendo γ-terpineno (14,4%) e α-terpineno (8,8%) as moléculas principais.

3, 2. Atividade antimicrobiana dos Óleos Essenciais contra a Burkholderia cepacia (Cco) Cepas

A atividade antimicrobiana dos seis diferentes EOs (E. caryophyllata (Ce), O. vulgare (Ov), R. officinalis (Ro), L. hybrida (Lh), M. alternifolia (Ma), e T. vulgaris (Tv)) foi verificado versusthe 18 Bcc tipo de cepas listadas na Tabela 1 e representante dos 18 conhecidas Bcc espécies; este painel inclui estirpes de origem clínica ou ambiental.os dados obtidos são reportados na Figura 1 e mostram o seguinte:i) todas as 18 estirpes bacterianas, tanto de origem clínica como ambiental, apresentaram, embora numa extensão diferente, sensibilidade a cada um dos seis EOs testados.ii) Segundo Ponce et al. , três óleos essenciais, ou seja, Ec, Tv, e Ov, exibiram uma potência inibitória muito alta versus todas as estirpes Bcc testadas. Na verdade, todos eles eram extremamente sensíveis a estes três EOs.(iii) curiosamente, estes três EOs deram uma auréola inibitória muito maior do que a produzida pela ciprofloxacina, sugerindo que eles são mais ativos do que este antibiótico.iv) os outros três EOs (Ro, Lh e Ma) apresentaram um grau de inibição do crescimento Bcc inferior ao demonstrado pelos três EOs acima mencionados; contudo, os halos inibitórios que produziram foram semelhantes e, em muitos casos, maiores do que os expostos pela ciprofloxacina.v) aparentemente, as estirpes clínicas e ambientais não apresentaram uma sensibilidade diferente a uma dada EO (ou a um conjunto de OE), Mas foram de forma diferente sensíveis à ciprofloxacina (Quadro 1). Dois deles, que é, LMG 14294 (B. stabilis) e LMG 18943 (B. dolosa), eram resistentes ao antibiótico e B. cenocepacia J2315, representando o sistema modelo para o estudo da Cco infecção em pacientes com FC, apresentou uma baixa sensibilidade à ciprofloxacina. Estas três estirpes têm uma origem clínica. Apesar disso, as mesmas três estirpes foram extremamente sensíveis aos três EOs mais ativos.vi) as estirpes de Bcc ambientais foram muito mais sensíveis à ciprofloxacina do que as suas contrapartes clínicas.A sensibilidade diferencial aos EOs e à ciprofloxacina foi confirmada por uma análise dos componentes principais (Figura 2). Como demonstrado no biplot, os vectores que representam os EOs são orientados diferentemente dos da ciprofloxacina (C+). Além disso, os vectores da Ov e da Tv contribuíram grandemente para o padrão diferencial de sensibilidade, confirmando assim que os óleos essenciais mais activos eram T. vulgaris e O. vulgare. Finalmente, uma comparação emparelhada (teste Kruskal-Wallis) dos padrões de inibição de EOs e ciprofloxacina (Figura 2) mostrou que estão presentes grandes diferenças entre halos inibitórios de diferentes EOs e ciprofloxacina, destacando as diferenças observadas (Tabela 1, Figura 1) na potência inibitória dos seis EOs.

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Figura 1

Inibitória poder dos óleos essenciais. São apresentados os resultados do ensaio de difusão à ágar realizado com as 18 estirpes de tipo Bcc. Cada barra do histograma representa a média da zona inibitória obtida para cada um dos EOs analisados. Nos gráficos são relatados os desvios-padrão para cada média aritmética obtida: (1) Thymus vulgaris, (2) Rosmarinus officinalis, (3) Lavandula hybrida, (4) Eugenia caryophyllata, (5) Melaleuca alternifolia, (6) Origanum vulgare, and (7) Ciprofloxacin.

Figure 2

Differences in the patterns of inhibition of essential oils. Upper panel: principal component analysis biplot of inhibitory patterns 18 Bcc strains (centroids) treated with different EOs and ciprofloxacin (C+). The percentage of variance explained by the first two principal components is reported. Painel inferior: valores de comparações emparelhadas (teste Kruskal-Wallis e protecção contra erros de Bonferroni) entre EOs e C+. n. s.: Não significativo; *; **; ***.

4. Conclusões

neste trabalho realizamos uma análise preliminar da capacidade de seis diferentes óleos essenciais para inibir o crescimento de cepas pertencentes ao complexo B. cepacia, cujos membros são perigosos para os pacientes com FC; na verdade, eles podem causar infecções graves em pacientes imunocomprometidos, tais como aqueles afetados pela fibrose cística. Esta ideia baseia-se em resultados anteriores que demonstram que os óleos essenciais são capazes de inibir o crescimento de alguns patógenos humanos, tais como E. coli, S. enteritidis, S. choleraesuis e S. typhimurium . No entanto, tanto quanto sabemos, nada se sabe sobre a capacidade destas misturas de compostos químicos para inibir o crescimento dos membros Bcc.por esta razão, seleccionámos seis óleos essenciais diferentes (E. caryophyllata, O. vulgare, R. officinalis, L. officinalis, M. alternifolia e T. vulgaris) que foram testados por um painel que incorporou as estirpes do tipo das 18 espécies Bcc conhecidas.

A composição das seis EOs foi bastante diferentes, mas, apesar disso, todos eles exibiram atividade inibitória versus todos os 18 Bcc cepas, sugerindo que um composto ou (mais provavelmente) mais de um composto (ver abaixo) presente em cada óleo essencial podem interferir com o Cco do crescimento celular. No entanto, os seis óleos essenciais apresentaram uma actividade inibitória diferente e de acordo com a Ponce et al. eles podem ser divididos em dois grupos diferentes; o primeiro inclui T. vulgaris, O. vulgare e E. caryophyllata, enquanto o outro embede R. officinalis, M. alternifolia e L. officinalis (Quadro 2). Na verdade, as estirpes Bcc eram extremamente sensíveis aos EOs pertencentes ao primeiro grupo e apenas sensíveis aos outros três.

Constituents LRI Essential oil
Lavandula hybrida Eugenia caryophyllata Melaleuca alternifolia Origanum vulgare Rosmarinus officinalis Thymus vulgaris
Tricyclene 928 0.2 tr
-Thujene 933 0.6 tr
-Pinene 941 0.4 0.2 3.8 1.7 11.5 4.3
Camphene 955 0.3 tr 0.4 4.1 0.1
Thuja-2.4(10)-diene 959 tr
Sabinene 977 0.1 tr 0.6
-Pinene 982 0.6 0.1 2.1 0.4 3.8 1.2
Myrcene 993 0.5 0.6 1.3 1.3
-Phellandrene 1006 0.4 tr 0.2
1-Hexyl acetate 1010 0.1
-3-Carene 1013 tr tr tr
1.4-Cineole 1018 0.1
-Terpinene 1020 tr 8.8 0.8 0.4
-Cymene 1027 0.3 tr 3.7 11.6 1.9 47.9
Limonene 1032 0.7 0.1 2.0 1.1 1.8 0.2
1.8-Cineole 1034 6.9 tr 2.9 0.6 43.9 0.2
()–Ocimene 1042 0.3
-Terpinene 1063 tr 14.4 1.7 0.4
cis-Sabinene hydrate 1070 0.1 tr tr
cis-Linalool oxide (furanoid) 1077 0.3
Terpinolene 1090 4.4 0.2 0.3
trans-Linalool oxide (furanoid) 1090 0.2
1-Pentyl butyrate 1094 tr
trans-Sabinene hydrate 1099 0.3
Linalool 1101 27.1 1.8 0.9 1.2
1-Octenyl acetate 1112 0.4
exo-Fenchol 1118 tr tr tr
cis-p-Menth-2-en-1-ol 1123 0.4
Terpinen-1-ol 1135 0.2
trans-Pinocarveol 1141 tr
trans-p-Menth-2-en-1-ol 1142 0.4
Camphor 1145 8.4 tr 11.3
1-Hexyl isobutyrate 1152 0.2
Isoborneol 1158 0.2
trans-Pinocamphone 1162 tr
Pinocarvone 1164 tr
Borneol 1168 3.2 0.4 4.2
Lavandulol 1171 0.6
cis-Pinocamphone 1175 tr
4-Terpineol 1178 3.9 tr 39.9 0.2 0.8
-Cymen-8-ol 1185 tr
-Terpineol 1190 1.7 4.2 0.4 2.6 0.6
1-Hexyl butyrate 1193 0.6
cis-Piperitol 1195 tr
Verbenone 1206 0.2
trans-Piperitol 1207 0.2
Nerol 1230 0.2
1-Hexyl 2-methylbutyrate 1235 0.1
1-Hexyl 3-methylbutyrate 1244 0.3
Chavicol 1252 tr
Linalyl acetate 1259 30.4
trans-Ascaridolglycol 1268 0.2
Isobornyl acetate 1287 0.2 0.7
Lavandulyl acetate 1291 3.3
Thymol 1292 1.6 43.1
Carvacrol 1301 71.8 0.4
1-Hexyl tiglate 1333 0.2
-Cubebene 1352 tr tr
Eugenol 1358 85.0
Neryl acetate 1365 0.4
-Ylangene 1373 0.2
-Copaene 1377 0.2 tr tr 0.6
Geranyl acetate 1383 1.0
-Gurjunene 1410 0.5
-Caryophyllene 1419 2.2 9.0 0.5 2.7 5.1 0.2
Lavandulyl isobutyrate 1424 0.1
trans–Bergamotene 1437 0.2 tr
-Guaiene 1440 1.4 0.2
(Z)–Farnesene 1444 0.2
-Humulene 1455 tr 1.4 0.1 0.2 0.5 tr
(E)–Farnesene 1459 1.1
Alloaromadendrene 1461 0.6
-Muurolene 1478 0.6
Germacrene D 1482 0.3
Valencene 1493 0.3
Viridiflorene 1494 1.3 0.2
Bicyclogermacrene 1496 0.7
-Muurolene 1499 0.2 0.2
-Bisabolene 1509 0.2 0.2
Lavandulyl 2-methylbutyrate 1513 0.4
trans–Cadinene 1514 0.5 0.4
-Cadinene 1524 0.6 1.8 0.9
trans-Cadina-1(2).4-diene 1534 0.2
Spathulenol 1577 0.2
Caryophyllene oxide 1582 0.6 0.5 0.6 0.3 tr
Globulol 1584 0.5
Guaiol 1597 0.2
1-epi-Cubenol 1629 0.3
T-Cadinol 1640 0.2
Cubenol 1643 0.2
-Bisabolol 1684 0.4
Monoterpene hydrocarbons 3.2 0.4 41.4 19.2 25.9 53.7
Oxygenated monoterpenes 88.2 0.0 48.7 77.2 64.6 45.6
Sesquiterpene hydrocarbons 4.7 11.2 7.6 2.9 9.1 0.2
Oxygenated sesquiterpenes 1.2 0.5 1.4 0.6 0.3 tr
Phenylpropanoids 85.0
Other derivatives 1.9 tr
Total identified 99.2 97.1 99.1 99.9 99.9 99.5
LRI: linear índices de retenção em relação à série de hidrocarbonetos; tr: traços.
Tabela 2
Composição (%) e as principais classes (%) de seis óleos essenciais utilizados neste trabalho.

No entanto, todos eles são capazes de inibir o crescimento das estirpes Bcc; particularmente interessante e intrigante é a constatação de que os halos inibitórios produzidos pela maioria dos EOs são (muito mais) maiores do que os produzidos pela ciprofloxacina, um dos antibióticos utilizados na terapia de infecções por CF. Sabemos perfeitamente que a sensibilidade a um determinado medicamento ou a uma mistura complexa de compostos antimicrobianos pode também variar fortemente entre estirpes pertencentes à mesma espécie bacteriana. No entanto, em nossa opinião, os dados preliminares relatados neste trabalho são particularmente encorajadores, uma vez que demonstram que a utilização de óleos essenciais pode representar uma forma alternativa de combater o crescimento do Bcc. É também muito interessante que, apesar do elevado número de experiências realizadas neste trabalho, nenhum mutante Bcc resistente a qualquer um dos óleos essenciais testados foi isolado (dados não apresentados). Isto representa uma importante descoberta, que fortemente sugere que a capacidade dos óleos essenciais para inibir o crescimento de Cco células pode ser, muito provavelmente, devido à presença simultânea de óleo de moléculas diferentes (cujo mecanismo de ação ainda é desconhecido) que pode funcionar em uma sinérgica de moda para antagonizar o Cco crescimento. Além disso, em nossa opinião, estas combinações de compostos não devem actuar sobre um único alvo, mas sim sobre diferentes alvos moleculares dentro da célula Bcc. Se assim for, o bloqueio simultâneo da actividade de diferentes alvos moleculares deverá diminuir fortemente a probabilidade de um mutante capaz de resistir aos óleos essenciais. Se este cenário for correto, estes dados podem pavimentar o caminho para a utilização de óleos essenciais para combater a infecção por Bcc em pacientes com CF.

conflito de interesses

os autores declaram que não há conflito de interesses em relação à publicação deste artigo.

os agradecimentos

Marco Fondi e Elena Perrin são financeiramente apoiados por uma bolsa avançada de HEMS (FAF 2012) e uma bolsa da Fundação” Buzzati-Traverso”, respectivamente.

Deixe uma resposta

O seu endereço de email não será publicado.